食用香料——香蘭素的抗氧化活性研究

　　摘要：對食用香料香蘭素的抗氧化活性進行了研究。分別采用甲基紫光度法、TBA顯色法、SDS—PAGE檢測法評價了香蘭素的抗氧化效果。結果表明，香蘭紊對蛋白質氧化降解具有明顯的保護作用，對脂質過氧化有較好的抑制作用，具有良好的清除HO·自由基的能力，其抗氧化活性遠遠強于Vc。

　　關鍵詞：香蘭素；vc；抗氧化活性

　　香蘭素(vaniUin)又名香草醛，為天然植物香料，主要存在于香子蘭科植物果實中，在輕工業、化學工業、農業生產上都有廣泛的應用，是醫藥化工中重要的原料或中間體，是用來制造治療高血壓、心臟病、皮膚病的常用藥物。香料在食品上的應用，主要是改善食品風味，增添食物色澤。另外，有防止食品變質的抗氧化及抗菌作用，研究發現，許多香料如：迷迭香、姜黃、丁香、百里香等都具有較強的抗氧化活性。

　　活性氧(ROS)是人體組織中許多生化反應的中問代謝產物，身體在代謝過程中所產生的ROS必須與組織細胞中的抗氧化系統達成平衡，一旦身體的抗氧化系統失去平衡，細胞中的氧化損害累積到相當程度，就會導致細胞結構和功能破壞、機體組織損傷。因此，ROS是包括腫瘤、心腦血管疾病、帕金森疾病、老年癡呆病和慢性肺炎等在內的多種疾病的重要誘因網。尋找能夠有效清除自由基而無毒副作用的抗氧化劑，預防和減輕上述疾病的發生和發展，一直是人類研究的重要課題之一。本文用甲基紫光度法、TBA顯色法、蛋白質凝膠電泳法測定了香蘭索的體外抗氧化活性，并比較、分析了香蘭素與已知抗氧化劑Vc的抗氧化能力。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　香蘭素：瑞爾豐化工有限公司；Vc、AAPH(2，2～偶氮二(2一脒基丙烷)二鹽酸鹽)、BHT(2，6一二叔丁基對甲基苯酚)：Sigma公司；牛血清白蛋白(BSA)；華美生物工程公司；十二烷基磺酸鈉(SDS)：Serva；實驗用鼠由甘肅省腫瘤醫院動物房提供，其余試劑均為國產分析純。

　　1.2儀器

　　LSHZ一300冷凍水浴恒溫振蕩器：江蘇太倉市實驗儀器廠；DYY一6B型穩壓穩流電泳儀：北京六一儀器廠；L8—60M型超高速離心機：Beckman；721分光光度計：上海第三分析儀器廠。
　　
    1.3方法

　　1.3.1清除HO·自由基的測定

　　取兩份2.06mmol／L甲基紫溶液，調pH為3.5后，向其中一份加入0.2mmol／LFeSO4，以0.6%H2O2啟動反應，一段時問后，以水為參比，于582nm處測吸光度值，記為A1。另一份不加Fenton試劑，測吸光度值，記為A。。則ΔA=A1一A。。測定清除率時，加入待測試劑，測吸光度值，記為A2。HO·的清除率=(A2一A1)／(A1一A0)×100%。

　　1.3.2脂質過氧化的測定

　　微粒體的制備參照Zhou等聞的方法。Lowry法測定蛋白質濃度。

　　脂質過氧化的測定參照Cai等嘲。1mL反應體系中含有0.2mol／LPBS，240μg-400μg的微粒體蛋白，加入0.1mmol／L抗壞血酸及10μgmol／LFeSO4啟動反應。在體系中加入0.1mL不同濃度待測物，于37℃振蕩孵育1h后，1.0mL20%三氯醋酸終止反應，加入1.5mL0.67%硫代巴比妥酸，于沸水浴顯色30min，冷卻后離心，上清液于532nm比色，其半抑制濃度IC50。

　　1.3.3蛋白質氧化降解的測定

　　蛋白質氧化測定依H.Y.Kwon等[61的方法稍加改進。10μg牛血清白蛋白(BSA)的氧化在0.2mol／LPBS中由水溶性偶氮引發劑2Ommol／LAAPH啟動，加入不同濃度的待測物，37℃水浴孵育24h后，加入0.02%BHT以防止氧自由基的進一步形成。樣品按常規SDS—PAGE電泳，0.05%考馬斯亮藍R一250染色。

　　2結果

　　2.1對HO·自由基的清除作用

　　香蘭素對HO-自由基的清除率呈現一定的量效關系(見圖1A)，隨香蘭素濃度的增加，對HO-的清除效果明顯增強，在濃度為180μmol／L清除率達到5O%，Vc在1000μmol／L時的清除率僅為41%(圖1B)，對HO-的清除作用不及香蘭素。

　　2.2對脂質過氧化的抑制作用

　　香蘭素對脂質過氧化的抑制率也呈現一定的量效關系，隨香蘭素濃度的增加，對脂質過氧化的抑制效果明顯增強，在濃度為76μmol／L抑制率達到50%，與此相比，vc對脂質過氧化的抑制作用要遠遠低于香蘭素，Vc在5000μmol／L時抑制率達到51%。

　　2.3對蛋白質氧化的保護作用

　　在10mmo]／LAAPH引發的氧化體系中，香蘭素(V)對BSA的氧化降解有很強的保護作用，當濃度為12.5μmol／L時，即有微弱的保護作用。當濃度為100μmol／L時，已完全保護了蛋白質的氧化降解。Vc對AAPH引發的蛋白質氧化降解的作用則較差，在2000μmo／L時，才出現微弱的保護作用。

　　3討論

　　近年來，國內外對香蘭素已有很多研究，主要為香蘭素合成方法的研究，有關香蘭索抗氧化性的報道極少，香蘭素在國內除直接用于制作食品外，主要用于調制食用香精，香蘭素對含油食品具有明顯的抗氧化作用，可顯著延長含油食品的保質期，對細菌及真菌的生長有明顯的抑制作用，另外，香蘭素對癲癇也有一定的治療效果啕。Vc是已知的HO-清除劑，對自由基具有很強的清除能力，是一種較早應用于食品、醫藥和臨床的抗氧化劑。在鑒定、比較各種藥物對自由基的清除能力時經常以它作為參照物。不同濃度Vc對Fenton反應所產生的羥基自由基進行清除時，其濃度與清除率之間存在明顯的量效關系嘲。但從本實驗結果來看，Vc抗脂質過氧化的作用較弱，表明Vc在此過氧化系統中的抗氧化作用是十分有限的。

　　在本實驗體系中，低濃度的香蘭素對脂質過氧化和蛋白質的氧化降解，表現出很強的保護作用。其清除HO·自由基、抑制脂質過氧化和對蛋白質的氧化降解的保護作用明顯優于Vc。實驗證明，香蘭素是一種很好的抗氧化劑，具有良好的抗氧化活性。我國具有豐富的香蘭素資源，很大一部分以化工生產的中間體出口到國外，國內對香蘭素的應用也僅限于食品、紡織和合成化工等行業，通過對香蘭素抗氧化活性的研究，香蘭素在食品和醫藥行業將具有更加廣泛的開發前景。