肉桂酸的測定—高效液相色譜法

方法名稱
桂龍咳喘寧膠囊—肉桂酸的測定—高效液相色譜法
儀器設備
儀器設備：
1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
日本inerstil ods-3 c18色譜柱（250×4.6mm，5μm）。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：甲醇 + 水 + 三乙胺 + 磷酸 = 70 + 30 + 0.2 + 0.05
2.2 檢測波長：278nm
2.3柱溫：室溫
試樣制備： 1. 稱取供試品
精密稱取本品藥粉試樣0.3g。
2. 內標溶液的制備
精密稱取內標丹皮酚對照品適量，加流動相溶液配成0.4g/l的內標溶液。
3. 對照品溶液的制備
精密稱取肉桂酸對照品10mg，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，得肉桂酸對照品儲備液。
4. 標準溶液的制備
分別精密量取0.5，1.0，2.0，3.0，5.0ml肉桂酸對照品儲備液，分別置10ml量瓶中，各加1ml丹皮酚內標溶液，加流動相至刻度，混勻，作為繪制標準曲線的系列濃度標準溶液。
5.供試品溶液的制備
將供試品置25ml錐形瓶中，加內標溶液1.5ml，加50%甲醇-水（磷酸調ph為3.0）13.5 ml（稱重），搖勻，浸泡30分鐘，超聲25分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇-水（磷酸調ph為3.0）補足減失的重量，混勻，濾過，取續濾液為供試品溶液。
注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
 
應用范圍
本方法采用高效液相色譜法測定桂龍咳喘寧膠囊中肉桂酸的含量。
本方法適用于中藥制劑桂龍咳喘寧膠囊
方法原理
供試品藥粉于錐形瓶中，加內標溶液，加50%甲醇-水（磷酸調ph為3.0）溶液，浸泡超聲后，放冷，濾過，濾液進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長278nm處檢測肉桂酸的吸收值，計算出其含量。
 
試劑
1. 甲醇（色譜純）
2. 磷酸
3. 三乙胺
 
試樣制備
1. 稱取供試品
精密稱取本品藥粉試樣0.3g。
2. 內標溶液的制備
精密稱取內標丹皮酚對照品適量，加流動相溶液配成0.4g/l的內標溶液。
3. 對照品溶液的制備
精密稱取肉桂酸對照品10mg，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，得肉桂酸對照品儲備液。
4. 標準溶液的制備
分別精密量取0.5，1.0，2.0，3.0，5.0ml肉桂酸對照品儲備液，分別置10ml量瓶中，各加1ml丹皮酚內標溶液，加流動相至刻度，混勻，作為繪制標準曲線的系列濃度標準溶液。
5.供試品溶液的制備
將供試品置25ml錐形瓶中，加內標溶液1.5ml，加50%甲醇-水（磷酸調ph為3.0）13.5 ml（稱重），搖勻，浸泡30分鐘，超聲25分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇-水（磷酸調ph為3.0）補足減失的重量，混勻，濾過，取續濾液為供試品溶液。
注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
 
操作步驟
1. 標準曲線繪制
精密吸取上述標準溶液20μl注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長278NM處測定肉桂酸的吸收值，以標準溶液濃度對供試品與內標峰的峰面積比值繪制標準曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。
2. 供試品的測定
精密吸取供試品溶液20μl注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長278NM處測定肉桂酸的吸收值，計算出其含量。