方法一、以鵝去氧膽酸為原料3α,7α-二乙酰膽酸甲酯的制備取無水甲醇36ml，通入1g干燥氯化氫氣體，加膽酸12g，攪拌，加熱回流20-30min，室溫放置數小時后析出晶體，冷凍，過濾，用乙醚洗滌，干燥，得膽酸甲酯。取膽酸甲酯2g，加苯9.6ml，加吡啶2.4ml，加乙酐2.4ml，振搖10-15min，室溫放置20h，將反應液倒入100ml水中，除去苯層，反復用蒸餾水洗滌，回收溶劑，固體殘渣用石油醚洗滌1次，用甲醇-水溶液重結晶，得3α，7α-二乙酰膽酸甲酯。

膽酸→膽酸甲酯→3α，7α-二乙酰膽酸甲酯鵝去氧膽酸的制備取二乙酰膽酸甲酯1.5g，加乙酸24ml，加鉻酸鉀溶液(取鉻酸鉀0.76g溶于1.8ml水中)，加熱至40℃，反應8h，加水120ml，振搖片刻，放置12h，過濾，用蒸餾水洗至中性，干燥，得3α，7α-二乙酰氧基-12-酮基膽烷酸甲酯，簡稱12-酮。取12-酮15g，加二乙二醇醚150ml，加80%水合肼溶液15ml，加氫氧化鉀15g，加熱至30℃回流15h，升溫至195-200℃，回流2.5h，升溫至217℃反應片刻，冷卻至190℃，加水合肼溶液0.7ml，在3h內由215℃升溫至220℃，冷卻，加蒸餾水600ml，加10%硫酸調pH3，析出結晶，過濾，水洗至中性，加乙酸乙酯，棄去水層，有機層用水洗1-2次，減壓蒸餾，得白色3α，7α-二羥基膽烷酸，即鵝去氧膽酸。

3α，7α-二乙酰膽酸甲酯→3α，7α-二乙酰氧基-12-酮基膽烷酸甲酯→3α，7α-二羥基膽烷酸（鵝去氧膽酸）熊去氧膽酸精品的制備取鵝去氧膽酸2g，加100ml乙酸，加乙酸鉀20g，振搖溶解，加鉻酸鉀1.5g(溶于10ml水中)，室溫放置過夜，加水200ml，析出結晶，過濾，水洗，干燥，得3α-羥基-7-酮基膽烷酸。

取3α-羥基-7-酮基膽烷酸4g，加正丁醇100ml，加熱至約115℃，分次加入金屬鈉8g，逐漸有白色漿狀物析出，繼續反應30min，加水120ml，攪拌升溫溶解透明，減壓蒸去有機層，殘渣加水500ml，溶解，過濾，濾液加10%硫酸調pH3，有白色絮狀物沉淀，過濾，水洗至中性，干燥，加乙酸乙酯洗滌，稀乙醇結晶，得3α，7β-二羥基膽烷酸，即熊去氧膽酸精品。鵝去氧膽酸[鉻酸鉀]→3α-羥基-7-酮基膽酸[金屬鈉，115℃]→3α,7β-二羥基膽烷酸（熊去氧膽酸）

方法二、以豬膽鹽或豬膽汁為原料利用薄層層析法從豬膽鹽或豬膽汁中，分離出熊去氧膽酸。豬膽鹽中含有游離型和結合型的UDCA，其含量約30%；豬膽汁中含有結合型UDCA，含量約0.6%。