本品在105℃干燥2h后定量時含核黃素C₁₇H₂₀N₄O₆98%以上①。

1．性狀

本品是黃~全黃色的結晶性粉末，有輕微的臭氣②。

2．鑒定試驗

將本品1mg溶于10mL水中，液體呈淡黃綠色，發出很強的帶黃綠色熒光，這種熒光當加稀鹽酸或氫氧化鈉試液，立即消失③。

3．純度試驗

（1）比旋光度  將本品避光，在105℃干燥2h后，精確地稱取約50mg，加0.1mol/L氫氧化鉀溶液2mL溶解，加新煮沸的冷卻水5mL后，邊充分混合，邊加無水乙醇2mL，再加新煮沸的冷卻水，定容至10mL，在30min以內測定此液的旋光度時應是 =-120~140°④。

（2）光黃素  取本品25mg，加不含醇的氯仿10mL，充分混合，5min后過濾，其顏色不應比0.1mol/L重鉻酸鉀溶液顏色更深⑤。

4．干燥失重

本品在105℃干燥2h，其失重應在1.5%以下⑥。

5．強熱殘留物

本品的強熱殘留物應在0.3%以下⑦。

6．定量法

本品在105℃干燥2h后，精確地稱取約0.015g，加稀釋冰醋酸（1→400）800mL，在50~70℃加熱溶解，冷卻后加水，定容至1，000mL作為檢液。另外用維生素B2標準品與試樣同樣操作，制作標準溶液，以水為對照，在波長445τm處測定檢液的吸光度A_T及標準溶液的吸光度As之后，立即分別向兩種溶液中加亞硫酸氫鈉0.02g，充分混合，脫色，測定此二液的吸光度A’_T及A’s，依據下式可求出核黃素的含量。但這些操作要避開直射日光，要使用遮光容器來進行⑧。

 

注  解

①JPIX規定在105℃，2h為98.0%以上，FCC規定105℃2h為98~100%。

②根據結晶析出時的條件，有絹絲狀、長針狀、柱狀、板狀、束狀，放射狀等很多種類的結晶型，但都是很細的。如果用X射線分析有兩種不同的結晶，mp為282℃及291℃。幾乎無臭或稍有臭味有苦味。無吸濕性，極難溶解在水中。但對水的溶解度，由于結晶形而有很大差異。在有機溶劑中一般是難溶的，幾乎不溶于氯仿、乙醚，但易溶于吡啶、酚中。在中性和酸性時是極穩定的，查在堿性中迅速分解。特別在光存在下，分解更快，變成光黃素。對氧化劑是比較穩定的。由于還原劑會失去黃色和熒光。本品的飽和水溶液是中性。

③水溶液呈特異的淡黃綠色，發出很強的熒光。這種熒光在紫外線下觀察，顯著增強。此熒光的強度在pH4~8下基本是穩定的，在pH4以下或pH8以上變弱，熒光光譜的極大波長在514~565nm之間。

④干燥條件與定量法相同，改成105℃，2h。代替以前用的0.1mol/L氫氧化鈉溶液，現在改成0.1mol/L氫氧化鉀溶液，本品的旋光性在堿性中強，在中性、酸性中極弱，所以在堿性下測定。

⑤在堿性中受光分解生成光黃素，此試驗是對可能混入的光黃素進行檢驗。用氯仿振蕩，核黃素不溶解，但光黃素溶解，所以利用此性質之差進行試驗。氯仿如含乙醇，核黃素也少量溶解，所以判斷困難。比較多用的重鉻酸鉀和光黃素，色調略不同，但規定的色調，與光黃素150μg/g（0.015%）相對應。

⑥JPIX、FCC也相同。

⑦0.35以下與FCC相同，在JPIX為0.2%以下。

⑧本品由于次硫酸鈉還原并脫色，所以從脫色前后的吸光度之差可計算其純度。本品的λmax是220~222nm、265~267nm、372~374nm、444~446nm，分子吸光系數是30,870（220nm），27，700（260nm）、12，200（450nm）（在pH值為7.0的磷酸緩沖液中溶解時）。本品的λmax與文獻略有差異，因此在定量時，對維生素B₂標準品也同樣操作，進行比較。在本文中雖沒有明顯表示，但加次硫酸鈉0.02g是針對檢液，標準溶液的各約為5mL。