4-甲基咪唑的測定（薄層法）

1.試劑與溶液
1.1三氯甲烷-無水乙醇混合溶液（8：2）
1.2碳酸納（HGB1293）.10%溶液.
1.3硫酸（GB/T625）.0.05ｍｏｌ/L溶液.
1.4硅膠（GF254）（薄層層析用）.
1.5碳酸氫鈉（GB/T640），
1.6碳酸氫鈉（/改變臺）8%溶液.
1.7展開劑［乙醚-三氯甲烷-甲醇（8：2：2）］.
1.8顯色劑
　　 A：0.5%對氨基奔磺酸的2%鹽酸溶液：
　　 B：0.5%亞硝酸鈉溶液.
　　 A與B臨用前等量混合.
1.9 4-甲基咪唑標準溶液
　　　稱取樣品4-甲劑咪唑（精1確至0.1000ｇ）置于100ｍｌ，容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，此興每ｌｍｌ相當于1.0ｍｇ4-甲基咪唑.
臨用前在用95%乙醇稀釋成每ｌｍｌ相當于0.1ｍｇ的4-甲基咪唑標準液.
2.方法步驟
2.1提取
　　　 稱取樣品5ｇ（準確至0.01ｇ）加15ｍｌ水溶解，加10%碳酸鈉15ｍｌ，于25ｍｌ，分液漏斗中，加三 氯甲烷一無水乙醇混合溶液80ｍｌ，劇烈振搖4ｍｉｎ～5ｍｉｎ，待完全分層后，將三氯甲完-無水乙醇提取液收集于250ｍｌ，具塞三角瓶中中，上述水層現動腦筋三氯甲烷-無水乙醇混合溶液70ｍｌ，提取一次，合并提取液，提取液中加入0.05ｍｏｌ/L硫酸20ｍｌ，劇烈振搖60次，分取水層，此液于60℃～70℃水浴上濃縮至2ｍｌ-3ｍｌ，緩緩加入碳酸氫鈉細粉約0.2ｇ，使不產生氣泡為止，用乙醇定溶到5ｍｌ.
2.2制板
　　 稱取硅膠（GF254）3ｇ，加80%碳酸氫鈉溶液IｍL，蒸餾水6ｍI，混勻涂于125ｍｍⅹ85ｍｍ薄板車，在空氣中自然干燥2ｍｉｎ，取出后放入干燥器備用.
2.3點樣
　 將4-甲基咪唑標準標準液10ｕｌ，20ｕI.30ｕｌ及樣品稀釋液100ｕｌ分別點薄板上 將薄板在展開劑中展至溶劑前沿達10Cｍ，取出薄板，吹干后用新配的劑進行噴霧，在5ｍｉｎ~10ｍｉｎ內，4-甲基咪唑的黃色班點可達最溶度，并穩定數小時，根據班點大小和顏色的深淺于標準班點比較，確定樣品中4-甲基咪唑的含量.

可樂中4-甲基咪唑含量測定：
將含有焦糖色素的樣品經固相萃取柱（XTR>500 mg）固相萃取，樣品過柱后，用有機溶劑洗脫，洗脫液濃縮后，用微量點樣器直接在層析材料聚酰胺薄膜上點樣，在裝有相應配比的展開劑中上行展開，碘蒸汽顯色后肉眼直接觀察，如果在比移值0.5~0.7之間同時觀察到比移值與標樣相同的棕色斑點，則認為該被測物中含有4-甲基咪唑。

　　該方法可以實現快速定性檢測樣品是天然釀造還是由人工配制，特別適合對醬油、醋、可樂等含有焦糖色素的樣品進行檢測。展開后的薄層板可長期保存以備復查，可應用薄層掃描儀進行測定。

論文1：氣相色譜法測定醬油中的4-甲基咪唑.pdf
論文2：毛細管氣相色譜法測定醬油中4-甲基咪唑的含量.pdf