分光光度測定法專題之5,5-雙硫代對硝基苯甲酸檢測法

摘要：5,5-雙硫代對硝基苯甲酸（DTNB）可以作為顯色劑在合適的PH的條件下與被測酶的氧化物反應生成黃色5-硫代-2-硝基苯甲酸陰離子，該陰離子能夠在412nm處能夠檢測處最大吸收峰，測定出該離子的濃度，再通過計算便可得到被測酶的含量。本文介紹了DTNB分光光度法檢測血清(漿)GSH-Px活力。
關鍵詞：5′5-雙硫代對硝基苯甲酸，DTNB, 69-78-3，檢測，分光光度法
 
前言
 
DTNB，5,5'-二硫雙(2-硝基苯甲酸)，CAS號: 69-78-3，分子式: C14H8N2O8S2，分子量: 396.35，廣泛用于生化研究，是生化反應色原，診斷試劑研究生產，測定蛋白質、多肽和組織中巰基的靈敏測定試劑。有機磷農藥中毒的監測（膽堿酯酶測定）。本文介紹了DTNB分光光度法測定血清(漿)GSH-Px活力。
 
1      檢測原理
 
GSH-Px可催化以下反應
                                CSH-Px
2GSH  +  H2O2  ========= GSSG   +   2H2O2
 
        終比酶促反應，反應體系中剩余的SH與酶活力成反比，它與顯色劑DTNB在合適的pH條件下反應生成黃色的5-硫代-2-硝基苯甲酸陰離子，此陰離子在412nm處有最人吸收，測定該陰離子的濃度，便可計算出-SH的減少量。由于-SH在沒有酶的條件下也能進行氧化(非酶促反應)，所以最后計算酶活力時必須扣除非酶反應所引起的-SH的減少。
 
2 分光光度法檢測血清(漿)GSH-Px活力
 
2.1 血清GSH-Px穩定性
 
        將不同血清標本分別存放于4℃和-4℃,結果表明4℃存放,第三天酶活力降低,-4℃貯存酶活力可穩定1周。
 
2.2 血清GSH-Px操作步驟
 
       分別設置測定管和非酶管，加入1.Ommo1/L GSH0.2m1，血清0. 2m1(非酶管加重蒸水0. 2ml替代血清)，各管再加入0. 1mlH2O2, 0. 8ml三氯醋酸，經離心后取上清液0. 8ml，加入DTNB顯色液，另設置空自管，操作同非酶管，但以磷酸鹽緩沖液替代(}SH溶液，412nm處，以空自管調零測定各管A bs.用分光光度計進行檢測。

結束語
 
Faraj[5]曾比較了幾種測定GSH-Px活力的方法,酶偶聯法特異性強,靈敏度高,但所需的谷光甘肽還原酶需進口。熒光法較比色法靈敏度高,但需采用熒光分光光度計。本分光光度法具有操作簡便,精密度高,試劑易購,不需要特殊儀器等優點,便于臨床實驗推廣應用。
 
參考文獻
 
[1]曾勤,陳耿等，DTNB比色法測定血清(漿)GSH-Px活力[J]，1997年12月.