DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽
1 范圍
本標準規定了DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的要求、試驗方法、檢驗規則和標志、標簽、包裝、運輸、貯存條件。
本標準適用于以DL-高半胱氨酸為原料，鉛合金作陰電極、石墨為陽電極，在鹽酸溶液中電解合成制得DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽。主要用作生化試劑。
分子式：C4H7NOS.HCl
相對分子質量：156.63（根據1997年國際相對原子質量表）。
2 規范性引用文件
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GB/T 191-2008,ISO 780:1997,MOD 包裝儲運圖示標志
GB/T 601－2002 化學試劑 標準滴定溶液的制備
GB/T 602-2002,ISO 6353:1982,NEQ 化學試劑 雜質測定用標準溶液的制備
GB/T 602-2002,ISO 6353-1:1982,NEQ 化學試劑 試驗方法中所用制劑及制品的制備
GB/T 617-2006,ISO 6353-1:1982,NEQ 化學試劑 熔點范圍測定通用方法
GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD 分析實驗室用水規格和試驗方法
《中華人民共和國藥典（2005年版一部）》
3 要求
DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的要求應符合表1規定。
表1 DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的要求
項 目 質量指標
合格品 優級品
外觀 白色或微帶黃色結晶性粉末 白色結晶性粉末
鑒別試驗（紅外光譜） 應與工作標準圖譜一致 應與工作標準圖譜一致
熔點/℃ 199.0～203.0 199.5～202.0
干燥失重的質量分數/% ≤ 0.5 0.4
鐵離子（以Fe3+計）/(mg/kg) ≤ 20 10
重金屬（以Pb計）/(mg/kg) ≤ 10 10
含量(HPLC)的質量分數/% ≥ 98.5 99.5
注：a如客戶有特殊需求時,供需雙方可協商在商務合同中約定。
4 試驗方法
4.1 安全提示
本試驗方法使用的部分試劑具有毒害性和腐蝕性，操作者須小心謹慎！如濺到皮膚上應立即用水沖洗，嚴重者應立即治療。
4.2 一般規定
本標準所用的試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和符合GB/T 6682規定的三級水。試驗中所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T 601-2002、GB/T 602-2002、GB/T 603-2002的規定制備。
4.3 外觀的測定
在自然光線下目測。
4.4 鑒別試驗 紅外光譜法
4.4.1 方法原理
當一束具有連續波長的紅外光照射到某一物質時，該物質分子中的原子或原子團振動的偶極距發生變化，產生共振而吸收一部分光能，將供其透過的光用單色器進行色散，就可以得到紅外吸收光譜。根據不同物質的特征吸收光譜定性。
4.4.2 儀器設備和材料
4.4.2.1 自動紅外掃描儀
4.4.2.2 分析天平 感量 0.1mg/0.01mg；
4.4.2.3 紅外快速干燥箱；
4.4.2.4 壓片機；
4.4.2.5 瑪瑙研缽；
4.4.2.6 真空泵；
4.4.2.7 篩子(篩孔大小為 0.074mm)；
4.4.2.8 溴化鉀晶片。
4.4.3 試劑
4.4.3.1 溴化鉀 AR。
4.4.4 樣品制備
4.4.4.1 溴化鉀晶片
取干燥的溴化鉀細粉（過篩孔大小為0.074mm篩）約200-300mg,置于直徑為13mm的壓片模具中，均勻鋪展，抽真空約2min，加壓至（0.8±106）kPa（約8T/cm2～10T/cm2）,保持壓力2min，撤去壓力并放氣取出制成的空白片。（目視空白片應呈透明狀。）
4.4.4.2 供試品晶片
取供試品約1mg～1.5mg,置于瑪瑙研缽中，取干燥的溴化鉀細粉（過篩孔大小為0.074mm篩）約200-300mg與樣品充分混勻,置于直徑為13mm的壓片模具中，均勻鋪展，抽真空約2min，加壓至（0.8±106）kPa約（8T/cm2～10T/cm2）,保持壓力2min，撤去壓力并放氣取出制成的樣品片（目視樣品片應呈透明狀）。
4.4.5 測定
4.4.5.1 溴化鉀晶片的測定
開機測定樣品按儀器說明書的操作方法進行，將溴化鉀晶片置于4000cm-1～400cm-1的紅外自動掃描儀掃描，得空白紅外光圖譜。
4.4.5.2 供試品壓片的測定
開機測定樣品按儀器說明書的操作方法進行，將供試品壓片置于4000cm-1～400cm-1的紅外自動掃描儀掃描，得樣品紅外圖譜（儀器已自動扣除空白紅外圖譜）。
4.4.6 鑒別（定性）
將供試品的紅外圖譜（主要吸收峰）與工作標準品圖譜對照，應一致。
其它要求與注意事項，可以參照《中華人民共和國藥典（2005年版一部）》中的附錄V的C《紅外分光光度法》（附錄28頁）。
4.5 熔點的測定
4.5.1 方法原理
以加熱的方式，使熔點管中的樣品從低于其初熔時的溫度逐漸升至高于其終熔時的溫度，通過儀器自動顯示的初熔及終熔的溫度，以確定樣品的熔點范圍。
4.5.2 儀器設備
4.5.2.1 WRS-2A 熔點儀；
4.5.2.2 封口玻璃毛細管（符合中國藥典）。
4.5.3 測定
設定初始溫度為189℃,升溫速率為1.5℃/min，其它按GB/T617-2006規定進行。其它要求與注意事項，可以參照《中華人民共和國藥典（2005年版一部）》中的附錄Ⅶ的C《熔點測定法》（附錄39頁）規定。
4.6 干燥失重的測定
4.6.1 方法原理
供試品在105℃下干燥至恒重。由減失的重量和取樣量計算供試品的干燥失重。用質量百分比來表示。
4.6.2 儀器設備
4.6.2.1 101-1A 電熱恒溫干燥箱；
4.6.2.2 分析天平（METTLER TOLEDO AB204-S）；
4.6.2.3 扁形稱量瓶；
4.6.2.4 干燥器。
4.6.3 測定
4.6.3.1 稱扁形量瓶重，在 105℃±2℃的烘箱中干燥不少于 2h，然后放在干燥器中冷卻30min，進行稱量，稱準至 0.0001g。重復干燥（第二次干燥時間不少于 1h）及稱量，重復操作直至兩次連續稱量間的差數不超過 0.0003g。用恒重扁形量瓶精密稱取樣品 1g，稱準至0.0001g。
4.6.3.2 將帶有試樣的恒重扁形量瓶放在 105℃±2℃烘箱中干燥不少于 2h，然后放在干燥器中冷卻 30min，進行稱量，稱準至 0.0001g。重復干燥（第二次干燥時間不少于 1h）及稱量，重復操作直至兩次連續稱量間的差數不超過 0.0003g。其它要求與注意事項，可以參照《中華人民共和國藥典（2005年版一部）》中的附錄Ⅸ的G《干燥失重測定法》（附錄47頁）規定。
4.6.4 計算
供試品的干燥失重X質量百分數〔%〕按（1）式計算：
m1- m2
X=----------------×100%……………………（1）
m1- m
m1——樣品+稱量瓶的質量；
m2——烘干后的質量；
m ——空稱量瓶的質量。
所得結果應保留2位有效數值，兩個結果的數值平均差不大于0.3%。
4.7 鐵離子檢查法 目視比色法
4.7.1 方法原理
用定量的供試品，稀釋在規定的試劑溶液中顯色，立即與標準的定量鐵溶液比較，稀釋的供試品溶液色不得深與標準的定量鐵溶液色。
4.7.2 儀器設備
一般實驗室玻璃儀器
4.7.3 試劑
4.7.3.1 稀鹽酸 10%鹽酸(體積分數)；
4.7.3.2 硫氰酸銨 30%硫氰酸銨(質量體積比)；
4.7.3.3 過硫酸銨 AR；
4.7.3.4 硫酸鐵銨 0.1mg/kg 鐵標準溶液。
4.7.4 測定
4.7.4.1 標準溶液的制備
精密移取1.0ml、1.5ml、2.0mL0.01mg/kg鐵標準溶液(臨用前，由0.1mg/kg鐵標準溶液稀釋成0.01mg/kg鐵標準溶液),于50ml比色管中，用水使成25mL，加入4ml鹽酸和50mg過硫酸銨，用水稀釋至35mL，再加3mL硫氰酸銨，用水稀釋至50mL，搖勻，備用。
4.7.4.2 供試品溶液的制備
樣品溶液：稱取1.0g樣品于50mL比色管中，加水溶解稀釋成25mL，加入4ml鹽酸和50mg過硫酸銨，加水稀釋成35mL，再加3mL硫氰酸銨，用水稀釋至50mL，搖勻，立即與標準管比較。
4.7.4.3 比色
樣品溶液管的顏色不得比定量鐵標準溶液色深。
其它要求與注意事項，可以參照《中華人民共和國藥典（2005年版 一部）》中的附錄Ⅸ的D《鐵鹽檢查法》（附錄45頁）規定。
4.8 重金屬檢查法 目視比色法
4.8.1 方法原理
重金屬離子與負二價硫離子在乙酸介質中生成有色硫化物沉淀。重金屬元素含量較低時，形成穩定的暗色懸浮液，可用于重金屬的目視比色法測定。
本方法用定量的標準鉛溶液稀釋成比色液，與制備的供試品溶液進行比色。稀釋的供試品溶液色不得深與標準的定量鉛溶液色。
4.8.2 儀器設備
一般實驗室玻璃儀器
4.8.2.1 SX2
-2.5-16 馬弗爐（或同等儀器）；
4.8.2.2 HHS 電熱恒溫水浴鍋。
4.8.3 試劑
4.8.3.1 硝酸鉛
0.1mg/kg鉛標準溶液(臨用前，由0.1mg/kg鉛標準溶液稀釋成0.01mg/kg鉛標準溶液)。
4.8.3.2 醋酸緩沖液 pH=3.5；
4.8.3.3 硫代乙酰胺試液
硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100mL，置于冰箱中保存。臨用前取混合液（由1mol/L氫氧化鈉溶液15 mL，水5.0mL，及甘油20 mL組成）5.0 mL，加上述硫代乙酰胺溶液1.0 mL，置水浴上加熱20s,冷卻，立即使用。
4.8.3.4 硝酸 AR
4.8.3.5 硫酸 AR
4.8.3.6 鹽酸 AR
4.8.3.7 氨試液
取濃氨水400mL，加水使成1000mL，即得。
4.8.3.8 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100 mL，使溶解，即得。
4.8.4 測定
4.8.4.1 標準溶液的制備
取配制供試溶液的試劑于50mL的坩堝中，蒸干，加醋酸緩沖液（PH=3.5）2mL，水15mL，微熱溶解，移至25ml比色管中，加1.0mL 0.01mg/kg鉛標準溶液(臨用前，由0.1mg/kg鉛標準溶液稀釋成0.01mg/kg鉛標準溶液) 加水稀釋成25mL，即得標準溶液。
4.8.4.2 供試品溶液的制備
精密稱取1.0g樣品于50mL的坩堝中，在電爐上緩緩灼燒至完全炭化，放冷，加硫酸0.5～1.0 mL使潤濕，低溫加熱至硫酸除盡，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷。于550℃±50℃的馬弗爐內灼燒至完全灰化。放冷，加鹽酸2mL，置水浴上蒸干后加15mL水，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸緩沖液（pH=3.5）2mL，微熱溶解后，移至25mL比色管中，加水稀釋成25mL，即得樣品溶液。
4.8.4.3 比色
在樣品管與標準管中，分別加硫代乙酰胺試液各2mL，搖勻，放置2min,同置白紙上，自上向下透視，樣品管的顏色不得比標準管更深。其它要求與注意事項，可以參照《中華人民共和國 藥典（2005年版 一部）》中的附錄Ⅸ的E《重金屬檢查法》（附錄45頁）規定。
4.9 含量的測定 高效液相色譜法
4.9.1 方法原理
將定量的供試品稀釋以乙腈+流動相溶液（磷酸二氫鉀、庚烷磺酸鈉和磷酸與水溶解液），用高效液相色譜儀于220mm處檢測。
4.9.2 儀器設備
4.9.2.1 一般實驗室玻璃儀器（主要有 1000mL 液相專用試劑瓶，抽濾瓶等）；
4.9.2.2 高效液相色譜儀 DIONEX P680 HPLC Pump
4.9.2.3 分析天平 感量為 0.0001g；
4.9.2.4 2XZ-1 真空泵；
4.9.2.5 AS3120 超聲波。
4.9.3 試劑
4.9.3.1 磷酸二氫鉀：AR；
4.9.3.2 庚烷磺酸鈉:HPLC 級；
4.9.3.3 磷酸:25%磷酸(體積分數比)；
4.9.3.4 氫氧化鈉:10mol/L 氫氧化鈉；
4.9.3.5 乙腈: HPLC 級。
4.9.4 測定：
4.9.4.1 流動相配制
4.9.4.1.1 A 溶液
1000mL容量瓶中加入0.68g磷酸二氫鉀，再加入1.01g庚烷磺酸鈉，再加入25%的磷酸26.8mL，加水適量溶解，用水稀釋到刻度，再用10mol/L的氫氧化鈉調pH至3.0，抽濾。
4.9.4.1.2 B 溶液
取乙腈250mL。
4.9.4.1.3 將制備的 A 溶液和 B 溶液配制成 A:B=4:1（體積分數）比例的流動相溶液。搖勻，備用。
4.9.4.2 供試品制備
稱取樣品約 50mg 置 25mL 容量瓶中，用流動相溶解并稀釋到刻度。搖勻，備用。
4.9.4.3 HPLC 定量測定
4.9.4.3.1 HPLC 色譜條件
測試前HPLC色譜儀應符合下列條件：
a 色譜柱：XB-C18（柱長250mm，內徑4.6 mm，粒徑5μm）；
b 檢測器：UVD；
c 流動相：A:B(4:1)體積分數；
d 流動相流速：1.0ml/min；
e 柱溫：30℃；
f 檢測波長：220nm；
g 進樣量：10μL。
4.9.4.3.2 取 10μL 樣品注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一法計算。
4.9.4.4 計算
4.9.4.4.1 供試品 DL -高 半 胱 氨 酸 硫 內 酯 鹽 酸 鹽 的含量按（2）式計算：
Ai
w =-----------×100%………………………………（2）
∑Ai
w ——DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的百分含量 ， %；
Ai — —DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的峰面積 ；
Ai ——總的峰面積。
4.9.4.4.2 測定結果保留至小數點后 2 位。用平行測定的算術平均值表示，兩次測定結果的算術平均
差不得大于 0.5%。
其它要求與注意事項，可以參照《中華人民共和國 藥典（2005年版一部）》中的附錄Ⅸ的E《高效
液相色譜法》（附錄33頁）規定。
5 檢驗規則：
5.1 DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽應由本公司質量檢驗部門進行檢驗，應保證出廠的 DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽都符合本標準的要求，每批出廠的 DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽都應有質量證明書。
5.2 用戶有權按照本標準的各項規定，檢驗所收到的 DL-高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的質量是否符合本標準的要求。
5.3 取樣方法：
用取樣器從每批中取樣，當N≤3時（N指總桶數）全部取樣，當3≤N≤300時取 n +1件。取不少于全檢量的六倍于容器中混勻（全檢量約為10g）。分成兩份，貼上標簽，注明: 生產廠名稱,產品名稱，批號，生產日期，取樣日期等。一份由檢驗部門進行檢驗，一份留樣。
5. 4 若檢驗結果中有一項指標不符合本標準要求時，應重新自兩倍量的包裝中取樣復檢，重新檢驗的結果中，即使只有一項指標不符合本標準要求時，則整批 DL -高 半 胱 氨 酸 硫 內 酯 鹽 酸 鹽 為 不 合 格品 。
5.5 當供需雙方對產品的質量發生爭議時,可由雙方協商解決或由選定的仲裁機構按本標準規定的檢驗方法進行仲裁檢驗。
6 標志、包裝、運輸、貯存
6.1 標志
產品的外包裝應有產品名稱、生產廠家、規格、凈重等標志，防潮、防強曬等標志應符合GB/T 191的規定。
6.2 包裝
用紙板桶包裝,內襯二層塑料袋,每桶凈重25kg。凈含量單件允許偏差1%，每批產品平均偏差應大于或等于零。
6.3 運輸和貯存
產品應貯存于陰涼、干燥、通風處。運輸時嚴防雨淋，強曬。不得與有毒有害及其它污染物品混裝混運。在規定的貯運條件下，DL -高半胱氨酸硫內酯鹽酸鹽的保證期 ： 從生產日期算起為二年 。