當前雷帕霉素的生產主要通過發酵法生產,如中國發明專利申請公布書CN101486976A所述一般西羅莫司發酵效價只有200μg/ml左右,發酵副產物較多,導致后序提取時的層析分離比較困難,工作較為復雜,酵培養的發酵液經過濾得菌體后經甲醇萃取濃縮后,再通過一系列純化工藝如色譜層析、萃取、結晶等獲得西羅莫司純品,產品收率低于20%。所以該說明書公開了一種吸水鏈霉菌及其應用的技術方案,提供了一種高單位的西羅莫司產生菌,效價為600μg/ml以上,但是產品收率只達到了30~35%。
CN102443012A公布了一種高純度提取純化方法
a.用丙酮或乙醇抽提發酵液過濾后得到的菌絲體,得到抽提液后,真空濃縮得濃縮抽提液;
b.用乙酸乙酯萃取發酵液過濾后得到的上清液,分離乙酸乙酯相得萃取液,真空濃縮得濃縮萃取液;
c.將a中的濃縮抽提液和b中的濃縮萃取液合并得濃縮液,并加入到裝有大孔樹脂的床層進行吸附,用丙酮和水的混合溶液作為洗滌劑洗滌大孔樹脂,收集洗脫液并真空濃縮,得濃縮洗脫液;
d.用乙酸乙酯萃取c得到的濃縮洗脫液,經無水硫酸鈉或無水硫酸鎂脫水后真空濃縮得濃縮液,上樣硅膠柱進行層析分離,正庚烷和丙酮混合溶液作為洗滌劑洗滌硅膠柱,正庚烷和丙酮混合溶液作為洗脫劑洗脫硅膠柱,收集洗脫液并真空濃縮得濃縮液;
e.將步驟d得到的濃縮液溶于石油醚或乙醚中結晶,干燥得到雷帕霉素粗品。
f.丙酮溶解雷帕霉素粗品,真空濃縮后用乙醚重結晶,干燥得到雷帕霉素純品。