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    磷酸腺苷鈉合成

    非售品
    CAS:51963-61-2
    分子式:C10H14N5Na2O13P3
    分子量:551.15

    方法一、以免肉為原料兔肉松的制備將冰凍過的兔體迅速去骨后絞碎,加入3-4倍量的95%乙醇,攪拌30min后過濾,制成肉糜,再加入2-2.5倍的乙醇重復上述操作,將肉糜置于乙醇中,加熱煮沸5min,取出并迅速置于冷卻的乙醇中降溫至10℃以下,過濾并壓干,將肉餅搗碎后冷風吹干制得兔肉松。


    兔肉[絞碎]→[冰浴]肉糜[95%冷乙醇]→[30min]變性肉糜[95%乙醇]→[煮沸5min]肉餅[搗碎,吹干]→[<10℃]肉松提取、吸附、洗脫將肉松加入4倍量的蒸餾水,攪拌30min,過濾壓成肉餅,搗碎后再加3倍量的蒸餾水重復上述操作,將兩次的濾液合并,加入總體積4%的冰醋酸,用6mol/L鹽酸調pH為3,冰浴冷卻后過濾,濾液經陰離子交換樹脂吸附,用pH3、0.03mol/L氯化鈉溶液洗滌柱上滯流的AMP、ADP及無機鹽等至薄層層析檢查無AMP、ADP斑點而有ATP斑點出現時,再用pH3.8、1mol/L氯化鈉液洗脫ATP,收集洗脫液,為防止ATP的水解,上述過程應在0-10℃進行。除熱原及雜質、結晶、干燥洗脫液用0.6%的硅藻土和0.4%的活性炭除去熱原及雜質,然后用6mol/L鹽酸調pH為2.5-3,在28℃恒溫水浴中加3-4倍量的95%乙醇,使ATP-二鈉鹽結晶,收集結晶,干燥,得ATP成品。ATP洗脫液[硅薄土,活性炭]→[10min]濾液[乙醇]→[pH2.5-3,28℃]ATP成品


    方法二、光合磷酸化法葉綠體混懸液的制備新鮮菠菜葉7kg,用水洗凈后加入Tris緩沖液10L,攪碎后離心,即得。


    新鮮菠菜葉[Tris緩沖液]→[搗碎3min,離心]葉綠體混懸液肌激酶的制備將乙二胺四乙酸鈉27.9g和氫氧化鈉63g加冷蒸餾水溶解后,稀釋,至37.5L。取家兔肌肉,浸入冰塊中,攪碎成肉漿,加入等體積的乙二胺四乙酸鈉-氫氧化鈉溶液,攪拌提取10min,離心,取上清液,加入總體積的0.05倍的2mol/L鹽酸,水浴加熱至90℃,保溫3min后,置冰浴中降溫至20℃,加2mol/L氫氧化鈉調pH至6.5,離心,取上清液裝瓶密封,冰箱冷凍保存。


    兔肉[乙二胺四乙酸鈉,氫氧化鈉]→[10min]肌激酶光合反應將磷酸氫二鈉150g用2L蒸餾水溶解后,再加入Tris50g、AMP55g,攪拌使其溶解,加水稀釋至4L,加6mol/L鹽酸調pH至7.8-7.9。將該溶液與含ATP55g的0.308%二氮蒽甲硫酸鹽溶液50ml及肌激酶250ml的混合溶液混合,加入葉綠體混懸液中,保持pH7.9-8,開始進行光照,光照時保持溫度為18℃左右,至反應終點(約1.5h)時停止照光,稍冷卻,攪拌下加入40%三氯乙酸凝固蛋白,過濾,上清液作進一步處理。


    5'-AM[磷酸氫二鈉,Tris,二氮蒽甲硫酸]→[10min]混合液[碘鎢燈,光照]→[pH8,18℃]反應液[40%三氯乙酸]→[<10℃]上清液三磷酸腺苷二鈉的提取汞鹽法提取上清液攪拌下加入硝酸汞溶液500ml(重量比為硝酸汞:硝酸:蒸餾水=2.5:0.9:2的混合溶液)靜置1h,過濾,濾餅用冷蒸餾水洗滌后加1.1L蒸餾水,成細漿狀混懸液,冰浴冷卻,使溫度降至3℃以下,保持溫度不超過5℃,通入硫化氫氣體,當溶液全部變黑時(約需25min),離心,上清液經用酸處理過的濾紙漿過濾,濾液加入5mol/L的氫氧化鈉液,調pH=3.8,再加入溶液總量的千分之五的5mol/L的氯化鈉和三倍量體積的95%的乙醇,冰箱中放置過夜,收集沉淀,將沉淀中加入丙酮研磨脫水,直至全部成粉末狀,丙酮洗滌2-3次,真空干燥即得三磷酸腺苷二鈉。


    上清液[硝酸,硝酸汞]→[1h]ATP汞鹽[硫化氫氣體]→[5℃,20-25min]ATP溶液[5mol/L氫氧化鈉,氯化鈉,乙醇]→[pH3.8]ATP鈉鹽[丙酮脫水]→[五氧化二磷減壓干燥]ATP成品樹脂法提取將上清液中加入3-4倍體積的95%乙醇,攪拌,冷卻放置4-5h,過濾,得粗品。將粗品溶解在少量蒸餾水中,加入1/2粗品質量的硅藻土,攪拌吸附雜質,過濾。濾液上732H+陽離子樹脂柱,當流出液的pH值由6下降至1,又上升到2時,表明柱內水已流完,即開始收集。將流出液用6mol/L的氫氧化鈉調pH=6.5-7后,上717C1-型陰離子交換樹脂柱,用25%的乙酸鋇檢查流出液,有白色沉淀出現時,說明吸附ATP和ADP足量,即可洗脫。先用pH2.5、0.003mol/L鹽酸溶液(含0.03mol/L氯化鈉)洗脫,電泳檢查流出液至ADP消失,260nm吸收值降至穩定,并略有回升時,說明有ATP出現,停止洗脫。洗脫下的ADP溶液調pH至7,用陰離子樹脂柱濃縮回收。然后用pH3.8、1mol/L氯化鈉溶液洗脫,至流出液不再被乙醇沉淀為止,洗脫下的ATP溶液按1:1的量加硅藻土過濾除熱原,調pH=3.8,加3-4倍體積的45%的乙醇,放置過夜。過濾,分別用無水乙醇和乙醚洗滌,脫水,真空干燥,即得ATP成品。


    方法三、氧化磷酸化法氧化將AMP50g用2L水溶解,如有不溶用6mol/L的氫氧化鈉調節至全溶。取磷酸氫二鉀184.8g,磷酸二氫鉀57.5g,硫酸鎂17.5g,溶于5L自來水中。將兩溶液混合,加入新鮮酵母2kg,葡萄糖175g,在30-32℃下緩慢攪拌,使其發酵,電泳法或測定無機磷方法觀察轉化情況,當部分AMP轉化時,可提高溫度至37℃,AMP斑點消失時為反應終點,約需4-6h。反應液冷卻至15℃加入40%三氯乙酸500ml,并用鹽酸調pH=2,過濾,得產品。

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