檢測方法:
1、樣品處理。將脫脂苦杏仁粕(前期杏仁油提取研究副產物)粉碎過100目篩備用,并用索氏提取法測定其殘油率。精密稱取10g,加入定量的乙醇溶液放入微波快速反應系統的反應釜中,進行微波輔助提取,趁熱過濾,收集濾液,無水乙醇定容至250ml容量瓶中,搖勻備用。
2、檢測步驟
(1)苦杏仁甙的紫外吸收光譜[7]。以甲醇為溶劑配制苦杏仁甙標準溶液(0.1mg/ml),在200~300nm波長范圍進行波長掃描,以甲醇做空白,結果顯示苦杏仁甙在波長為219nm處有最大吸收峰,因此確定檢測波長為219nm。
(2)流動相的篩選。利用C18做固定相,用不同體積(15∶85,20∶80,30∶70)配比的甲醇和水溶液做流動相進行篩選,當甲醇和水的體積比為20∶80時,甲醇水溶液和苦杏仁甙基線分離較好。
(3)標準曲線的繪制。色譜條件:色譜柱為C18(4.6×150mm,5μm),流動相為20∶80(體積分數)的甲醇水溶液,流速為0.8ml/min,紫外檢測波長為219nm,柱溫為30℃,進樣量為10μl。所有樣品均經0.45μm有機濾膜過濾后進樣。精密稱取苦杏仁甙標準品,甲醇定容至50ml,制得苦杏仁甙標準溶液0.1mg/ml,分別移取2,4,6,8,10ml于10ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按上述色譜條件,取10μl注入液相色譜儀,測定,以峰面積對相應的苦杏仁甙濃度做標準曲線。
(4)提取溶劑的選擇。選擇無水乙醇做提取溶劑。
(5)選擇提取液的體積。取苦杏仁脫脂粕10g,以無水乙醇為溶劑,微波功率500W,料液比1∶14,提取溫度60℃,提取時間30min,進行微波輔助浸提,每個處理重復3次,用無水乙醇定容250ml,分別精密移取體積為0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml提取液于10ml容量瓶中,恒溫干燥箱加熱揮干,冷卻,甲醇定容,搖勻,0.45μm濾膜過濾,按上述色譜條件測定,取其平均值。
(6)樣品測定。精密移取1.3.1項的苦杏仁甙提取液于10ml容量瓶中,恒溫干燥箱加熱揮干,冷卻,甲醇定容,搖勻,0.45μm濾膜過濾,備用待測。