反相高效液相色譜法同時測定乳酸及乳酸甲酯
盧定強, 徐　蓓, 李　暉, 肖潔瑾

摘要:乳酸及乳酸甲酯是重要的有機化工原料。在由乳酸合成乳酸甲酯的綠色化工工藝研究過程中, 為了優化反應條件, 建立了一種同時分離測定乳酸連續酯化反應體系中乳酸和乳酸甲酯的反相高效液相色譜法。HPLC分析條件為:Prevail C18色譜柱, 以V〔N aH2 PO4 /H3 PO4 緩沖液(pH2. 0)〕:V(甲醇) =90∶10 為流動相, 流速為1. 0 m L m in- 1, 檢測器為示差折光檢測器。在進樣量為0. 2～ 20 μg成良好的線性關系。乳酸的加樣回收率為94.55% ～ 106.94%, 相對標準偏差為1. 23% ～ 2.01%;乳酸甲酯的加樣回收率為91. 03% ～ 109. 0%, 相對標準偏差為1.25% ～ 2. 88%。該方法準確、簡捷、可靠。

1. 1　儀器和試劑
LB - 05平流泵(北京衛星制造廠);R ID - 10A示差折光檢測器(日本SH IMADZU 公司);N - 2000雙通道色譜工作站(浙江大學智能信息工程研究所);Rheodyne 7725i進樣閥(Rheodyne公司)。L-乳酸(質量濃度0.3 g mL-1 , 日本武藏野公司);L-乳酸甲酯(質量濃度1.098 g mL- 1 , 日本武藏野公司);甲醇(CG );磷酸二氫鈉(AR);磷酸(AR), 水為M ilipo re超純水。

1. 2　色譜條件
Prevail C18分析柱(美國A lltech 公司);流動相:V[ N aH2PO4 /H3 PO4 緩沖液(pH2. 0)] ∶V (甲醇)=90∶10;流速:1.0 mL m in- 1;進樣量:20 μL;R ID- 10A 示差折光檢測器;柱溫:室溫。

1. 3　方法
1. 3. 1　對照品溶液的制備
精密量取乳酸對照品333.5 μL 和乳酸甲酯對照品91 μL, 置同一100 mL容量瓶中, 用流動相溶液溶解并定容至刻度, 得質量濃度為1.0 g L-1的混合對照品母液。再將該母液配制成不同質量濃度的對照品溶液, 備用。

1. 3. 2　樣品溶液的制備
將發酵的粗L-乳酸提取液過濾, 在混合器中與甲醇混合后, 流經由D61樹脂裝填的固定化床柱式反應器, 在出液口直接取反應產物體系的混合液用流動相溶液準確稀釋100倍, 用0.45 μm 微孔濾膜過濾, 備用。

1. 3. 3　流動相的配制
配制c(NaH2 PO4 ) =20mmol L- 1的水溶液, 用當信噪比為3, 乳酸的最小檢測限為45 ng;乳酸甲酯最小檢測限為23 ng。

2. 3　樣品的測定
實驗中, 以固定化床層高度為20 cm, 反應溫度60 ℃, 物料流速1.0mL m in-1為反應條件, 乳酸與甲醇按不同摩爾比進行反應, 并對產物進行測定可知, 當乳酸量一定時, 隨著加入甲醇量的增加, 乳酸的轉化率上升, 當n (乳酸)∶n(甲醇) =1∶8時, 乳酸轉化率可達到88.18%