HPLC法測定山茱萸中沒食子酸的含量
 
童榮生（四川省醫學科學院·四川省人民醫院藥劑科，成都 610072）           

摘要：目的：建立山茱萸藥材中沒食子酸的含量測定方法，以控制其質量。方法：采用高效液相色譜法，以Discovery C18(5μm,250×4.6mm)為色譜柱，甲醇-0.1%磷酸溶液（8:92）為流動相，檢測波長271nm。結果：沒食子酸的進樣量在0.040μg～0.400μg范圍內與其峰面積值有良好線性關系（r=0.9999）,平均加樣回收率為100.78%，RSD為1.64%。結論：該方法簡便易行、準確可靠，可用于山茱萸藥材中沒食子酸的質量控制。

關鍵詞：沒食子酸；高效液相色譜法；山茱萸

Determination of Gallic Acid Contained in Fructus Corni by HPLC

Abstract: Objective：To establish a method for determination of gallic acid contents in Fructus Corni by HPLC. Methods：The determination was performed on a Discovery C18 conlumn(5μm,250×4.6mm)by UV detector at 271nm with methanol-0.1% phosphoric acid(8:92)as the mobile phase at the flow rate of 1.0ml/min. Results：The amount of gallic acid was linear with its area over the range

from0.040 to 0.400μg(r=0.9999).The average recovery and the relative standard deviation of gallic acid were 100.78% and 1.64%(n=6),respectively. Conclusion:The method appeared to be sensitive,accurate and can be used for the quality control of  gallic acid in Fructus Corni.

Key words：Gallic acid；HPLC；Fructus Corni

山茱萸為山茱萸科植物。山茱萸cornus off icinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。它是我國40種重點常用中藥材之一，具有補益肝腎、澀精固脫的功效，用于眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽痿遺精、遺尿尿頻、大汗虛脫等癥候。目前，國家標準中是用薄層掃描法測定其三萜類成分——熊果酸的含量，而沒有對有機酸類成分——沒食子酸進行含量測定[1]。近年來研究表明，沒食子酸具有收斂、止血、止瀉、殺菌、抗病毒等作用[2]。因此，本文建立了HPLC法測定山茱萸中的沒食子酸的含量，為其質量控制提供依據。

1  儀器與試藥

1.1 儀器   Alliance高效液相色譜儀（2690溶劑輸送系統，996二極管陣列檢測器，Millenium32數據管理系統，美國Waters公司）；UV-2100型紫外可見分光光度計（日本島津）；十萬分之一電子天平（西德Sartorius）。

1.2 試藥  沒食子酸為中國藥品生物制品檢定所提供（0831-9501），在選定色譜條件分離后，按歸一化法計算得含量為99.56%。甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為重蒸餾水。山茱萸藥材由成都中藥材公司提供（產于四川安縣）。

2  方法與結果

2.1色譜條件  色譜柱：Discovry C18(5μm,250×4.6mm)，柱溫：25℃。流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（8:92），流速：1.0ml/min。檢測波長：271nm，靈敏度：0.01AUFS。

2.2檢測波長的確定  取沒食子酸對照品適量，用流動相稀釋成10μg/ml，以流動相為空白，在200～600nm波長范圍內掃描。結果表明，Cur在271nm波長處有最大吸收。

2.3 標準曲線的制備  精密稱取沒食子酸對照品適量，用甲醇溶解并稀釋成20.0μg/ml的儲備液。精密量取此儲備液2.0、4.0、8.0、16.0、20.0μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積值（A）對進樣量（C）進行回歸，得標準曲線方程為：A=2.132×106C+1.486×102，R=0.9999。結果表明，沒食子酸的進樣量在0.040μg～0.400μg范圍內，與其峰面積值有良好的線性關系。

2.4 供試品溶液的制備  取山茱萸藥材，60℃下干燥至恒重，粉碎成粗粉，精密稱定1g，加50%甲醇40ml，超聲提取2次，每次30min，濾過，加50%甲醇定容至100ml，用0.45μm濾膜濾過，取續濾液，進樣。在選定色譜條件下，沒食子酸和樣品中其它組分色譜峰可基線分離，分離度大于1.5，沒食子酸對照品、山茱萸藥材樣品色譜圖見圖1、圖2。

圖1    沒食子酸對照品

圖2   山茱萸樣品

2.5 精密度試驗  精密吸取同一供試品溶液10μl，重復進樣5次，測得沒食子酸峰面積的相對標準差（RSD）為0.86%。

2.6 穩定性試驗  取同一樣品供試液分別于0、2、4、6、8h，進樣10μl，測得樣品中沒食子酸峰面積值的RSD為0.92% 。實驗表明，樣品供試液在8h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗  按擬定的含量測定方法，取同一批樣品五份，分別制備樣品供試液，測得沒食子酸含量的RSD為1.53%。

2.8 加樣回收率實驗  精密稱取已知含量的山茱萸粗粉（沒食子酸含量為0.21%），加入一定量的沒食子酸對照品，按供試品溶液制備方法操作，取10μl進樣、測定，結果沒食子酸的平均回收率為100.78%，RSD為1.64%(n=6)。結果見表1。

表1  加樣回收率試驗結果

2.9 樣品測定  對三批藥材的含量測定結果見表2。