5-甲基尿苷液相檢測方法
1 試驗儀器、試劑
a) 試驗儀器:高效液相色譜儀(紫外檢測器);
b) 記錄儀:色譜工作站;
c) 乙腈:色譜純;
d) 磷酸二氫鉀:分析純;
e) 磷酸:分析純。
2 試驗條件
a) 色譜柱:Agilent Extend-C18,250×4.6mm,5μm 或類似柱;
b) 檢測波長(UV):254 nm;
c) 流動相:乙腈、0.01M KH2PO4溶液(用稀磷酸調 pH3.0);
d) 梯度:
時間 乙腈 0.01M KH2PO4 (pH=3.0)
0 6 94
4 6 94
9 20 80
13 20 80
13.1 6 94
16 6 94
e) 流速:1.0mL/min;
f) 柱溫:30 ℃;
g) 進樣量:10μL;
h) 溶劑:乙腈–水(10:90)。
3 試驗準備
精密稱取40mg對照品于100ml容量瓶中,用溶劑溶解,定容至刻度,混勻,配制兩份;
精密稱取20mg供試品于50ml容量瓶中,用溶劑溶解,定容至刻度,混勻,配制兩份。
4 樣品分析
進樣溶劑,檢查基線飄移、噪聲等其他系統信號干擾。
樣品按下列次序進樣:
批號 溶液名稱 針次
對照品 第 1 份對照溶液 1
第 2 份對照溶液 1
樣品 1 第 1 份供試溶液 1
第 2 份供試溶液 1
樣品 2 第 1 份供試溶液 1
第 2 份供試溶液 1
… …
技術指標9的測試方法文件對照溶液峰面積與稱量的比值A/W(Area/mg)的相對標準偏差RSD不得超過0.5%。
同一批供試溶液的2次進樣所得含量的相對標準偏差RSD不得超過0.5%。
5 色譜純度
按面積歸一法:總雜質=單個雜質之和。
6 含量
公式如下:
AS×WR×VS 100×PR
甲基尿苷(%)=-----------------------×--------------------
AR×WS×VR 100-L
AS——供試溶液5-甲基尿苷的峰面積;
AR——對照溶液5-甲基尿苷的峰面積;
WR——配制對照溶液時,5-甲基尿苷對照品的稱量,mg;
WS——配制供試溶液時,5-甲基尿苷供試品的稱量,mg;
VS——配制供試溶液時,容量瓶的體積,ml;
VR——配制對照溶液時,容量瓶的體積,ml;
PR——5-甲基尿苷對照品的含量,%;
L——5-甲基尿苷供試品的實測干燥失重,%。