附：氣相色譜法測定頭孢吡肟中N--甲基吡咯烷雜質含量

【摘要】 目的 用氣相色譜法測定鹽酸頭孢吡肟中N-甲基吡咯烷雜質含量。 方法 采用毛細管氣相色譜法，氫火焰離子化檢測器（FID），彈性石英毛細管柱HP-1（60m×0.53mm，5μm）;柱溫100℃;氣化室溫度250℃;檢測器溫度250℃;載氣為氮氣;進樣量1μl;分流比為10∶1。 結果 N-甲基吡咯烷濃度在1.1213～134.56μg/ml時線性關系良好，線性方程:A 吡咯烷 /A內標 =0.01561C-0.00854，相關系數r=0.99998;RSD（%）=0.00486。加樣回收率101.73%;檢測限0.6ng。 結論 本法簡便、準確、適用性廣，便于在生產過程中進行監控。

【關鍵詞】 氣相色譜法

　　頭孢吡肟（cefepime）為第四代廣譜頭孢菌素，它對革蘭陰性菌，特別是腸桿菌、銅綠假單胞菌有良好活性，同時保持了對革蘭陽性菌的作用，臨床廣泛用于防治多種細菌感染性疾病 ［1］ 。

頭孢吡肟母核3位側鏈上的一個基團為N-甲基吡咯烷（N-methylpyrrolidine，NMP），其四價氮正離子與4位側鏈羧基形成分子內鹽結構，可提高水溶性，增強抗菌作用，但N-甲基吡咯烷有可能從頭孢烯骨架上分解，造成殘留，故須對頭孢吡肟中的N-甲基吡咯烷殘留量進行檢測。文獻［2］采用氣相色譜法，頂空進樣進行測定，由于頭孢吡肟在受熱條件下會降解產生NMP，使測定結果偏高;此外，殘留的頭孢吡肟有可能吸附NMP，使得進樣后NMP不出峰。本文采用氯仿 提取、直接進樣的方法測定鹽酸頭孢吡肟中NMP的含量，方法普及性強，測定方便，色譜峰穩定，峰形美觀，檢測靈敏。

　　1 儀器和試藥
      HP-4890氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（FID）;鹽酸頭孢吡肟（批號:010703、010801、010802）為廣州白云山化學制藥廠試制。N-甲基吡咯烷為化學純，ACROS Organics，Inc.97%，批次A018227401;吡啶，化學純，天津市永大化學試劑開發中心，99.5%;氯仿、二氯甲烷、乙醇、丙酮均為分析純。

　　2 色譜條件
       色譜柱為彈性石英毛細管柱HP-1（60m×0.53mm，5μm）;柱溫100℃;氣化室溫度250℃;檢測器溫度250℃;載氣為氮氣;進樣量1μl;分流比為10∶1。

　　3 方法與結果

　　3.1 溶液的配制
      內標溶液 取吡啶約0.1g，精密稱定，置100ml容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻。

      對照品溶液 取N-甲基吡咯烷約0.1g，精密稱定，置100ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取貯備液與內標溶液各5ml，置100ml容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻。供試品溶液 取鹽酸頭孢吡肟約0.2g，精密稱定，置研缽中，加氯仿2ml，在通風櫥內研磨3min，用氯仿分次轉移至10ml容量瓶中，精密加入內標溶液0.5ml，并用氯仿稀釋至刻度，充分振搖，濾過，取續濾液。

　　3.2 專屬性
      鹽酸頭孢吡肟合成過程中使用的溶劑包括有乙醇、丙酮、二氯甲烷，分別取N-甲基吡咯烷、吡啶、丙酮、乙醇、二氯甲烷各約0.1g，置同一100ml容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，搖勻，精密量取1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，乙醇、丙酮、二氯甲烷、吡啶與N-甲基吡咯烷的分離度符合系統要求，相對保留時間（RRT）依次為:乙醇（0.76）、丙酮（0.79）、二氯甲烷（0.86）、氯仿（1.00）、N-甲基吡咯烷（1.25）、吡啶（1.50）。

3.3 標準曲線的制備及結果
     精密量取對照品貯備液0.1、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0與12.0ml，分別至100ml容量瓶中，各精密加入內標溶液5ml，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，取1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以N-甲基吡咯烷濃度為橫坐標，以A 吡咯烷 /A 內標 為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程為:A吡咯烷 /A 內標 =0.01561C-0.00854，r=0.99998。

N-甲基吡咯烷濃度在1.1213～134.56μg/ml范 圍線性關系良好。

3.4 精密度和檢測限
     精密量取對照品貯備液3.0、5.0與7.0ml，分別置100ml容量瓶中，各精密加入內標溶液5ml，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，取1μl注入氣相色譜儀，每個濃度分別連續進樣6次，以測得的N-甲基吡咯烷峰面積與內標峰面積的比值計算RSD，結果為0.51%。

上述色譜條件下，N-甲基吡咯烷最低檢出限為0.6ng（S/N=3）。

　　3.5 回收率
     精密稱取已知NMP濃度的樣品9份，各約0.2g，置研缽中，加入氯仿2ml，在通風櫥內研磨3min，用氯仿分次轉移至10ml容量瓶中，各精密加入內標溶液0.5ml，分別精密加入對照品貯備液0.3、0.5與0.7ml，并用氯仿稀釋至刻度，充分振搖，濾過，量取續濾液1μl，注入氣相色譜儀，按內標法以峰面積計算。該法的加標回收率為101.73%。

　　3.6 樣品測定
       批號為010703、010801和010802的樣品中NMP含量分別為0.009%、0.003%和0.006%。

4 結論 本法采用氯仿提取、直接進樣的方法測定頭孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量，該法專屬性強，精密度良好，回收率高，可用于檢查鹽酸頭孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量。該法色譜峰穩定，峰形美觀，檢測靈敏，普及性強。